Исследование мочи методом сухой химии

В клинической лабораторной практике для исследования физико-химических свойств мочи большое распространение получили поликомпонентные (многофункциональные) тест-полоски. При помощи таких тест систем возможна не только оценка химического состава, но и определение таких параметров как цвет, мутность и наличие патологических клеточных элементов в моче.

Использование поликомпонентных тест-полосок позволяет сократить количество образцов для микроскопического исследования, так как на этапе исследования мочи методом сухой химии происходит отсеивание «здоровых» проб, а микроскопическому исследованию подвергается материал только с положительными результатами по одному из параметров тест-системы. Кроме того, использование тест-полосок позволяет выявить клеточные элементы, подвергшиеся лизису (эритроциты, лейкоциты), что значительно повышает точность исследования и соответственно своевременную диагностику патологического процесса.

При оценке компонентов мочевого осадка тест-полосками, следует учитывать, что системой определяются не сами клеточные элементы, а биохимические параметры, имеющие высокий коэффициент корреляции с ними. Так, о наличии эритроцитов будет свидетельствовать положительный тест на гемоглобин, лейкоцитов – положительный эстеразный тест.

Подготовка образцов мочи к проведению анализа при помощи тест-полосок методом сухой химии:

• Моча должна быть комнатной температуры. Если контейнер с мочой хранился в холодильнике, то до начала тестирования необходимо довести образец до комнатной температуры.
• Контейнер с мочой не должен подвергаться воздействию температуры свыше 30 0С и прямых солнечных лучей.
• Необходимо исключить образцы мочи, содержащие пищевые и лекарственные красители.
• Для тестирования используют свежую НЕЦЕНТРИФУГИРОВАННУЮ мочу.

Важным фактором, влияющим на результаты теста сухой химии является время, которое проходит от момента сбора мочи до начала исследования в лаборатории.

Изменения, которые происходят в моче с течением времени после сбора:

• Снижение прозрачности из-за кристаллизации растворенных в моче веществ.
• Повышение рН из-за аммиака, выделяемого в мочу бактериями.
• Снижение концентрации кетоновых тел и глюкозы.
• Разрушение билирубина.
• Лизис эритроцитов и других клеточных элементов.
• Загрязнение материала посторонней бактериальной флорой.

Чувствительность тест-полосок для исследования мочи методом сухой химии, а также цвет индикатора будет зависеть от реагентного состава каждой зоны, который будет отличаться в зависимости от производителя.

Основные клинически значимые параметры, которые можно получить при исследовании мочи методом сухой химии:

• ФИЗИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ – удельный вес, рН
• ХИМИЧЕСКИЕ ПАРАМЕТРЫ – уробилиноген, билирубин, глюкоза, белок, кетоновые тела, аскорбиновая кислота.
• КЛЕТОЧНЫЙ СОСТАВ – кровь (эритроциты), лейкоциты, бактерии (нитриты).

Проведение анализа мочи с помощью тест-полосок:

• Хорошо перемешайте (не взбалтывая) исследуемую биологическую жидкость переворачиванием контейнера.
• Возьмите из тубы столько полосок, сколько необходимо для непосредственного использования и немедленно тубу плотно закройте фабричной крышкой с осушителем.
• Полоску погрузите на 1-2 секунды в исследуемый раствор, чтобы все тестовые зоны были смоченными.
• Избыток жидкости с полоски удалите, проведя ребром полоски о край сосуда. Полоску оставьте в горизонтальном положении на фильтровальной бумаге.
• По истечении необходимого времени проведите оценку изменения цвета зон полоски визуально, сравнивая с эталонной шкалой на упаковке.
• Сравнение изменения цвета тестовых зон полоски, за исключением зоны лейкоцитов, проводят в течении 1-2 минут, изменения цвета индикатора через 2 минуты не имеют диагностическое значение.

Рис.1. Порядок исследования мочи тест-полосками методом сухой химии.

При трактовке результатов тестирования образцов мочи нужно учитывать возможное влияние на аналитические способности реагентных зон тест-полосок различных факторов, ведущих к ложноположительным/ложноотрицательным результатам.

Наиболее часто встречающиеся причины, влияющие на результаты исследования:

Удельный вес

Высокая концентрация аскорбиновой кислоты (выше, чем 700 мг/л) может вызвать смещение окрашивания зоны к более низким значениям удельного веса. Величины рН мочи выше, чем 6,5 смещают цветное окрашивание зоны к более низким величинам удельного веса. Значения рН мочи ниже, чем 6,0 смещают окрашивание зоны к более высоким величинам удельного веса.

Нитриты

Отрицательный результат не исключает бактериурию и может говорить об инфицировании бактериями, не содержащими нитрат-редуктазы (Streptococcus, Neisseria gonorrhoeae, Staphylococcus, Mycobacterium tuberculosis , Enterococcus).

Чувствительность данного теста снижена при:

• Исследовании мочи с высоким удельным весом.
• Высокой концентрации аскорбиновой кислоты (400 мг/л и больше).
• Малом количестве нитрит-ионов (1.0 мг/л и меньше) в моче.

рН

Длительное стояние мочи приводит к смещению рН мочи к более высоким значениям из-за аммиака, выделяемого в мочу бактериями.

Во время процедуры тестирования тест-полоска должна погружаться в мочу на определенное время, так как при слишком длительном погружении рН мочи появляется тенденция к понижению (закислению).

Кетоновые тела

Лекарственные и диагностические препараты на основе фенолфталеина или сульфонфталеина, присутствующие в моче, могут в щелочной среде зоны окрашиваться в красный и даже пурпурный цвет.

Ложное занижение результатов может быть при длительном хранении мочи в открытом контейнере вследствие испарения ацетона.

Глюкоза

Минимальное количество глюкозы, которое может быть выделено почками в норме (физиологическая глюкозурия), окрашивает диагностическую зону в зеленоватый оттенок, которая, иногда, на этикетке обозначен «normal».

Белок/альбумин

Ложноположительные результаты может давать моча больных, принимавших хининовые препараты или лекарства на основе производных хинолина. Ложноположительные результаты могут быть связаны с использованием недостаточно чистой посуды для сбора мочи со следами дезинфицирующих и моющих средств, особенно на основе четвертичных аммониевых солей. Неионогенные или анионактивные детергенты могут быть причиной заниженных или ложноотрицательных результатов.

В сильно щелочной моче (рН выше 8) или в моче с исключительно высокой буферной емкостью тест может дать ложноположительные результаты.

Лейкоциты

Интенсивность окраски зоны индикации повышается при сильно щелочной реакции мочи и увеличенной относительной плотности мочи. Определению мешает сильная окраска мочи при повышенном содержании в ней билирубина и других хромогенов.

Билирубин/Уробилиноген

Исследуемую мочу следует предохранять от прямого солнечного света, который способствует окислению билирубина, что приводит к занижению или отрицательному результату.

Уробилиноген в концентрации выше 100 мкмоль/л интерферирует с определением билирубина. Также интерферируют вещества, имеющие красный цвет или приобретающие красную окраску под влиянием кислой среды реакционной зоны (например, феназопиридин).

Эритроциты/гемоглобин

Положительную реакцию может давать моча, сильно зараженная некоторыми бактериями, дрожжами или плесенью; содержащая высокие концентрации аскорбиновой кислоты (витамин С) или ингибиторов лекарственного происхождения.