Рекомендации к использованию коагулометров Behnk Elektronik

Введение

Изучение показателей плазменного звена гемостаза имеет важное значение при различного рода патологиях:

• Мониторинга лечения сердечно-сосудистых заболеваний и для профилактики их возникновения.
  
• Обследования печени в качестве тестов определяющих ее белоксинтетическую функцию в лабораторный профиль включены определение протромбинового времени и фибриногена, уменьшение которых указывает на снижение способности гепатоцитов синтезировать белки, что отражает высокий уровень поражения печени и возникает при гепатитах и циррозах различной этиологии.
• Контроля свертывающей активности крови при терапии непрямыми антикоагулянтами в течение всего периода лечения.
• Диагностики гиперкоагулемии и гипокоагуляции при патологии свертывающих факторов крови и антикоагулянтой системы и т.д.

Кроме того, в научных целях важно изучение влияния новых препаратов на реологические свойства крови в эксперименте. На смену ручным (визуальным) тестам пришли полуавтоматические коагулометры: приборы, позволяющие оценить свертывающие свойства крови клоттинговыми методами, т.е. при помощи тестов, в основе которых лежит образование сгустка фибрина в плазме или цельной крови. Достаточно высокую оценку у потребителя получили коагулометры фирмы Behnk Elektronik (Германия), причем они имеют широкое использование за рубежом и в России не только в лабораториях гемостаза (1, 2, 3), но и как приборы сравнения для клинических испытаний новых анализаторов (4, 5). Пользователи отметили высокое качество работы, простоту эксплуатации и надежность коагулометров в сочетании со сравнительно низкой ценой приборов Behnk Elektronik (6). Особую популярность в малых и средних лабораториях нашей страны приобрели полуавтоматические коагулометры серии «Thrombostat», серии «Thrombotimer» и CL 4. Это компактные и простые в эксплуатации приборы, позволяющие быстро получить результаты при использовании небольшого объема пробы – 50-100 мкл, что обеспечивает экономный расход реагентов и имеет значение в педиатрической, неонатальной практике и гериатрии.

Функциональные особенности коагулометров серии «Thrombostat» и серии «Thrombotimer»

Коагулометры являются полностью открытыми системами. Это является важной особенностью, так как при использовании реагентов различных популярных производителей приборы обеспечивают получение достоверного результата. Поэтому, лаборатория для исследований гемостаза может использовать те коммерческие тестовые системы, которым отдает предпочтение.

Рис. 1 Коагулометр Thrombostat

Принцип детекции сгустка

В основу работы коагулометров серии «Thrombostat» положен механический метод с детекцией сгустка по вязкости. Суть его заключается в следующем: Под каждым измерительным каналом вращается магнит, который имеет точно выверенную силу вращения. Шарик, помещенный дозатором вначале исследования в кювету, после старта начинает вращаться у ее стенки, до тех пор, пока не будет остановлен образовавшимся сгустком. Локализация остановки шарика зависит от вязкости: так при образовании мелких хлопьев, что наблюдается во время определения фибриногена, шарик перемещается к центру кюветы (рис.1), при образовании более плотных сгустков шарик останавливается у стенки (рис.2). Вращение шарика контролируется сенсорами – передатчиком, испускающим свет и приемником, который улавливает поток света отраженный шариком во время вращения. Как только шарик прекращает движение, независимо от локализации места его остановки, регистрируется отсутствие движения и время окончания теста. При этом не имеет значения оптическая плотность образца, а соответственно, и то, что используется для анализа: плазма или цельная капиллярная кровь.

Рис. 2 Коагулометры Thrombotimer

Это является плюсом, так как использование цельной капиллярной крови и минимальный объем пробы, который забирается при этом из пальца, позволяет обеспечивать контроль лечения непрямыми антикоагулянтами, а, также, позволяет рекомендовать эти приборы к использованию в педиатрической, неонатальной практике, гериатрии и для экспериментальных исследований при использовании мелких пород животных в эксперименте.

В основе работы приборов серии «Thrombotimer» лежит запатентованный Behnk Elektronik оптико-механический метод с детекцией сгустка по мутности. В качестве материала для исследования используется плазма, полученная из стабилизированной венозной крови.

Оптическая система состоит из источника света с одной стороны прозрачной кюветы и фоточувствительного элемента с другой, в качестве перемешивающего устройства используется шарик, который легко помещается на дно реакционной кюветы при помощи дозатора. Регистрация коагуляции происходит на основе оптико-механических эффектов. Оптический заключается в регистрации изменения оптической плотности, когда фибрин образует сгусток. А механический связан с вращением шарика, который усиливает оптическую неоднородность за счет смещения сгустка к центру кюветы и, соответственно, увеличивает оптическую плотность. С помощью такой методики становится возможным измерение слабо выраженной коагуляции в патологических пробах с низким содержанием фибриногена.

Зависимость приборов от технического обслуживания

Необходимо отметить, что оптико-механическая система приборов серии «Thrombotimer» защищена от пыли и влаги, имеет долговечный магнитный привод, а серия «Thrombostat», в свою очередь, имеет профессионально выполненную конструкцию, надежный и невосприимчивый к помехам в электросети блок питания, вследствие чего приборы не нуждаются в техническом обслуживании.

Количество каналов

Приборы серии «Thrombostat» могут иметь 1 или 2 измерительных канала, а серии «Thrombotimer» – 1, 2 или 4. Наличие нескольких каналов для измерения позволяет ускорить процесс исследования гемостаза, так как можно параллельно проводить тест у нескольких независимых проб, или проводить парное измерение с автоматическим вычислением CV (коэффициент вариации) между каналами.

Зависимость приборов от технического обслуживания

Необходимо отметить, что оптико-механическая система приборов серии «Thrombotimer» защищена от пыли и влаги, имеет долговечный магнитный привод, а серия «Thrombostat», в свою очередь, имеет профессионально выполненную конструкцию, надежный и невосприимчивый к помехам в электросети блок питания, вследствие чего приборы не нуждаются в техническом обслуживании.

Количество каналов

Приборы серии «Thrombostat» могут иметь 1 или 2 измерительных канала, а серии «Thrombotimer» – 1, 2 или 4. Наличие нескольких каналов для измерения позволяет ускорить процесс исследования гемостаза, так как можно параллельно проводить тест у нескольких независимых проб, или проводить парное измерение с автоматическим вычислением CV (коэффициент вариации) между каналами.

Программируемые методы

Все приборы имеют возможность программирования 4 базовых методик:

1. протромбиновое время (ПВ); 
2. активированное частичное тромбопластиновое время (АЧТВ); 
3. тромбиновое время (ТВ); 
4. фибриноген.

Эти методы позволяют моделировать как внешний, так и внутренний механизмы гемостаза и общие пути свертывания.

Так, ПВ оценивает состояние внешнего механизма свертывания, который запускается высвободившимся из поврежденной ткани тромбопластином. Тест АЧТВ определяет состояние факторов, участвующих во внутреннем механизме коагуляционного гемостаза, инициирующегося фактором Хагемана (ф.XII). 

Определение тромбинового времени и фибриногена позволяют составить представление о конечным этапе свертывания, то есть образовании фибрина стабилизированного. В зависимости от необходимости набор базовых тестов можно перепрограммировать и ввести те, которые входят в соответствующий профиль.

Кроме того, приборы серии «Thrombostat»  имеют возможность определять лизис фибринового сгустка, что выделяет их среди всех популярных полуавтоматических коагулометров. 

На случай отклонения от нормы в коагулометрах обеих серий имеется еще 4 свободных канала для ввода дополнительных тестов, позволяющих провести определение активности специфических факторов, для полной оценки состояния гемостаза.

Для работы на приборах производителя Behnk Elektronik не требуется длительной подготовки оператора вследствие быстрого овладения методиками.

Термостат

Легкость использования связана еще и с тем, что имеется встроенный термоблок для инкубирования проб и реагентов с автоматической регистрацией времени инкубации.

• Thrombostat1 имеет 5 дополнительных гнезд инкубирования образцов, 
• Thrombostat2 – четыре – для проб и одно – для реагентов, 
• Thrombotimer1 – 2, и Thrombotimer2 - 4 гнезда для проб и по 2 – для реагентов, 
• Thrombotimer4 – 8 позиций для проб и 4 – для реагентов.

Табл.1 Наличие у коагулометров дополнительных позиций для инкубации проб и реагентов

Старт

Коагулометры серии «Thrombotimer» имеют автоматический старт при добавлении реагента к плазме в реакционную кювету, при этом изменяется оптическая плотность реакционной смеси и включается время отсчета теста.

Приборы серии «Thrombostat» автоматически начинают старт при внесении реактива стартовой пипеткой или включаются оператором нажатием клавиши СТАРТ при добавлении реагента любой пипеткой.

Пересчет результатов

Полученные результаты автоматически пересчитываются и выдаются в выбранных единицах: в сек, %, МНО, Ratio, мг/дл, г/л. Исключение составляет Thrombostat1, который выдает результаты только в сек и МНО.

Вывод результатов

Результаты выводятся на алфавитно-цифровой монитор (для каждого канала) и автоматически распечатываются на внешнем принтере (типа Epson LX-300+II, DPU-414), исключение составляет Thrombostat 1 (так как не имеет порта RS 232). 

Калибровочные кривые

Коагулометры автоматически выстраивают калибровочные кривые и обеспечивают их хранение (кроме Thrombostat 1).

Интерфейс

В коагулометрах имеется интерфейс RS 232, что позволяет подключать их к принтеру и внешнему компьютеру (кроме Thrombostat 1).

Дополнительные функции

Полуавтоматические коагулометры серии «Thrombostat» могут работать от любого источника постоянного или переменного тока с напряжением 10-26 В, в том числе от автомобильного прикуривателя. В совокупности с небольшими габаритами и весом (1-2 кг) это обеспечивает мобильность приборов и может с успехом использоваться выездными бригадами при проведении диспансеризации по проекту «Здоровье нации» или у постели больного.

Особенности коагулометра CL 4

Расширенные возможности коагулометра CL4 несколько выделяют его из общего ряда полуавтоматических коагулометров Behnk Elektronik.

Так, CL 4 имеет встроенный блок для пробоподготовки на 40 кювет, 4 измерительных канала, 12 дополнительных гнезд для предварительной инкубации проб и 3 – для инкубации реагентов, что существенно увеличивает производительность. Наличие 3 разъемов для стартовых пипеток способствует ускорению процесса исследования коагулограммы, так как можно проводить несколько разных тестов одновременно, что позволяет исследовать срочные пробы. 

У прибора имеется жидкокристаллический дисплей для каждого канала, на который осуществляется вывод рассчитанных результатов в сек, %, МНО, Ratio, мг/дл, г/л и встроенный термопринтер с шириной бумаги 80 мм для их распечатки.

Сравнительные характеристики коагулометров BehnkElektronik

Табл. 2 Сравнительные характеристики приборов BehnkElektronik

Обобщение

Неоспоримым достоинством коагулометров фирмы Behnk Elektronik является то, что:

• не требуют сервисного обслуживания и просты в эксплуатации;
• могут определять время лизиса фибринового сгустка (Thrombostat 1, Thrombostat 2, CL 4);
• способны работать от автоприкуривателя (Thrombostat 1, Thrombostat 2);
• могут проводить исследование гемостаза в плазме с низким содержанием фибриногена (Thrombotimer 1, Thrombotimer 2, Thrombotimer 4);
• все коагулометры являются полностью открытыми системами.

Рекомендации по выбору коагулометра

Табл. 3 Рекомендации по выбору коагулометра в зависимости от нагрузки лаборатории

 Учитывая все выше сказанное, можно рекомендовать полуавтоматические коагулометры серии Thrombostat, серии Thrombotimer и CL4:

• для использования в лабораториях с низким и средним потоком пациентов (табл.3),
• для участковых поликлиник,
• для стационаров до 400 коек, имеющих кардиологическое, гастроэнтерологическое отделения,
• к использованию в неонатальной и педиатрической практике, а также в гериатрии,
• коагулометры Thrombostat 1 и Thrombostat 2 можно дополнительно рекомендовать к использованию на выезде и у постели больного,
• все полуавтоматические коагулометры могут быть использованы  для научных исследований при изучении гемостаза у мелких пород животных.

Литература:

1. CL 4 можно дополнительно рекомендовать для проведения срочных проб. О. S. Ungerstedt, О. Antinic, M. Blomback.  Antithrombin antigen and activity in patients with acquired antithrombin deficiency - is there a difference? // J.of Thromb. and Haemost. – May, 2004. - Vol. 2. -  Is. 5.- P. 838-839. 
   
2. M.L. Wramsby, M.I. Bokareva, M. Blomback, A. K. Bremme. Response to activated protein C during normal menstrual cycle and ovarial stimulation // J. Oxford. - Human Reproduction. – April, 2000. - Vol. 15. - № 4. – Р. 795-797.  
3. А.А. Козлов, А.М. Берковский, Н.Д. Качалова, Т.М. Простакова, Е.В. Сергеева, В.А. Фунт.  Работа с отечественными коагулометрами и реагентами НПО «Ренам»// Москва. – 2007г.
4. А.В. Безруков, М.В. Кутепов, Б.И. Минченко. // Результаты клинических испытаний оптико-механического коагулометра «Минилаб 701» // Москва. – 2006г.
5. А.В. Безруков, Е.Н. Ованесов. Новые программируемые анализаторы показателей гемостаза НПП «ТЕХНОМЕДИКА» // Москва. - Лаборатория.- №4. - 2006 г. 
6. Баркаган З.С., Момот А.П., Тараненко И.А. Шойхет Я.Н. Основы пролонгированной профилактики и терапии тромбоэмболий антикоагулянтами непрямого действия//Барнаул. – 2002г.